超微量分光光度計無須配備電腦的全波,可快速準(zhǔn)確的檢測核酸、蛋白質(zhì)和細胞溶液,同時配備比色皿模式,進行細菌等培養(yǎng)液濃度的檢測,可達到0.5ng/ul。核酸檢測每次測量所需要的樣品量僅需0.5-2ul即可直接將樣品點于加樣臺上。無需比色杯或毛細管等附件。測量結(jié)束后,可以選擇直接將樣品擦去或者再用移液器回收樣品。所有步驟簡單快速,一氣呵成。
超微量分光光度計的主要原理是根據(jù)朗伯-比爾(Lamber-Beer)定律進行濃度測定的:
A=K·C·L;
式中:
A為吸光度;
K為吸(消)光系數(shù);
C為溶液的濃度;
L為液層厚度。
此公式說明在入射光一定時,溶液的吸光度與溶液的濃度及液層厚度成正比。此式就是光的吸收定律的數(shù)學(xué)表達式,又叫朗伯-比爾定律。
超微量分光光度計于核酸定量上的應(yīng)用:
核酸的定量是超微量分光光度計使用頻率高的功能??梢远繙y定溶于緩沖液的寡核苷酸,單鏈、雙鏈DNA以及RNA含量。這是由于核酸、核苷酸及其衍生物都具有共軛雙鍵,具有紫外吸收的特性,最大的吸收波長在260nm,吸收波谷在230nm。
除了核酸濃度,超微量分光光度計同時顯示幾個非常重要的比值表示樣品的純度,如A260/A280的比值,用于評估樣品的純度,因為蛋白的吸收峰是280nm。純凈的樣品,比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8或者2.0,表示存在蛋白質(zhì)或者酚類物質(zhì)的影響。A230表示樣品中存在一些污染物,如碳水化合物,多肽,苯酚等,較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0。